■ 制品内容 (20 次量)

pMD20-T vector (50 ng/μl) 20 μl Ligation Mighty Mix*1 50 μl × 2 Positive Control Insert*2 10 μl     *1: Ligation Mighty Mix与DNA Ligation Kit (Code No.: 6023) 是同一种试剂。 *2: 3’端带有“A”突出端的DNA片段 (约200 bp)。 (以E.coli 基因组DNA为模板，使用TaKaRa Ex Taq进行PCR反应得到的扩增产物。)(10 ng/μl)

■ 制品说明

使用Taq DNA聚合酶进行PCR反应，扩增获得的PCR产物3’端附有一个“A” 碱基。利用3’端附有“A” 碱基的PCR产物进行克隆时，与含有3’-T末端的载体通过T-A碱基互补配对原则进行克隆，此种方法被称为T-A克隆。 Mighty TA-cloning Kit是在短时间内快速地将PCR产物进行T-A克隆的试剂盒。连接反应使用DNA Ligation Kit，操作简便，可在短时间内高效地进行连接反应。   ■ 保存 -20℃。

■ 使用注意事项

1. Ligation Mighty Mix在冰上融解，轻轻混合后再使用。 2. 克隆时，根据插入片段的长度和方向，有时即使插入了DNA片段也会有不出现终止密码或读码框不改变的情况发生，在蓝白选择培养基上会形成淡蓝色菌落。出现这种现象时，建议进行菌落PCR确认插入片段。 3. 进行切胶回收纯化DNA片段时要避免UV照射时间过长。长时间照射，DNA会受到损伤，影响克隆效率。 4. PCR用质粒模板与克隆载体 (pMD20-T vector；具有Ampr) 有同样的选择标记基因时，为防止出现质粒模板自身的转化菌落，将PCR反应液凝胶电泳后回收目的片段，纯化后再进行克隆。

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